Mononukleose (Vollblut/Serum/Plasma)

Ein Schnelltest für den qualitiativen Nachweis heterophiler IM Antikörper in Vollblut, Serum oder Plasma zur Diagnose von infektiöser Mononukleose (IM).

Nur fürdieIn-vitro-Diagnostik durch Fachkundige bestimmt.

VERWENDUNGSZWECK
Der Keul-o-test Mononukleose (Vollblut/Serum/Plasma) ist ein schneller chromatographischer Immunoassay für den qualitativen Nachweis von heterophilen IM Antikörpern in Vollblut, Serum oder Plasma zur Diagnose von infektiöser Mononukleose.

ZUSAMMENFASSUNG
Infektiöse Mononukleose (IM) wird durch das Epstein-Barr Virus verursacht, das zur Familie der Herpesviren gehört. Symptome bei IM sind Fieber, Halsschmerzen und geschwollene Lymphdrüsen. In sehr seltenen Fällen können Herzprobleme oder Probleme des zentralen Nervensystems vorkommen. Die Diagnose von IM erfolgt auf Basis von heterophilen Antikörpern. Heterophile IM Antikörper gehören zur IgM Klasse. Sie sind bei 80-90% der akuten IM Fälle vorhanden und können bei 60-70% der Patienten während der ersten Woche der klinischen Erkrankung nachgewiesen werden. ^1,2,3,4
Der Keul-o-test Mononukleose (Vollblut/Serum/Plasma) ist ein einfacher Test, der einen Extrakt aus Rindererythrozyten verwendet, um heterophile IM Antikörper qualitativ und selektiv in Minuten in Vollblut, Serum oder Plasma nachzuweisen.

TESTPRINZIP
Der Keul-o-test Mononukleose (Vollblut/Serum/Plasma) ist ein qualitativer ‚lateral flow' Immunoassay für den Nachweis von heterophilen IM Antikörpern in Vollblut, Serum oder Plasma. Bei diesem Testverfahren ist aus Rindererythrozyten extrahiertes Antigen im Testlinien Bereich der Testkassette gebunden. Während der Testdurchführung reagiert die Probe mit auf der Membranschicht für Markierungsreagenzien befindlichen Partikeln, die mit aus Rindererythrozyten extrahiertem Antigen beschichtet sind. Diese Mischung wandert chromato-graphisch in Längsrichtung des Tests und reagiert mit dem aus Rindererythrozyten extrahierten Antigen. Wenn die Probe heterophile IM Antikörper enthält, wird eine gefärbte Linie im Testlinienbereich erscheinen, die ein positives Ergebnis anzeigt. Enthält die Probe keine heterophilen IM Antikörper so erscheint keine gefärbte Linie im Testlinienbereich: das Test-ergebnis ist negativ. Eine farbige Linie wird immer im Bereich der Kontroll-Linie(C) erscheinen und dient damit als Verfahrenskontrolle, die korrekt zugefügtes Probenvolumen und erfolgte Membrandurchfeuchtung anzeigt.

REAGENZIEN
Die Testkassette enthält Partikel, die mit aus Rindererythrozyten extrahiertem Antigen beschichtet sind, und eine Membran, die mit aus Rindererythrozyten extrahiertem Antigen beschichtet ist.

VORSICHTSMASSNAHMEN

• Nur für die In-vitro-Diagnostik durch Fachpersonal. Nicht nach Ablauf des Haltbarkeitsdatums verwenden.
• Der Testkassette sollte bis zum Gebrauch im verschlossenen Beutel bleiben.
• Nicht Essen, Trinken oder Rauchen beim Umgang mit Proben und Testkits.
• Den Testkassette nicht verwenden, wenn der Beutel beschädigt ist.
• Alle Proben und Kontrollen müssen wie infektiöses Untersuchungsmaterial behandelt werden. Bestehende Vorsichtsmaßnahmen beachten und die Standardverfahren zur richtigen Abfallbeseitigung der Proben und Kontrollen befolgen.
• Humanplasma für die positiven und negativen Kontrollen wurde mit dem ELISA Verfahren auf Antikörper gegen HIV Typ HIV-1/HIV-2, sowie HbsAG und anti-HCV getestet und als negativ ausgewertet. Beim Umgang und der Entsorgung dieser Bestandteile trotzdem vorsichtig sein.
• Während der Untersuchung der Proben entsprechende Schutzkleidung tragen (Laborkittel, Einweg-Handschuhe und Schutzbrille).
• Feuchtigkeit und Temperatur können Ergebnisse negativ beeinträchtigen.

LAGERUNG UND HALTBARKEIT
Wie abgepackt im verschlossenen Beutel entweder bei Raumtemperatur oder gekühlt (4‑30°C) lagern. Die Testkassette ist bis zu dem Haltbarkeitsdatum verwendbar, das auf dem verschlossenen Beutel aufgedruckt ist. Die Testkassette sollte bis zur Verwendung im verschlossenen Beutel bleiben. NICHT EINFRIEREN. Nicht nach Ablauf des Haltbarkeitsdatums verwenden.

PROBENGEWINNUNG UND VORBEREITUNG

• Der Keul-o-test Mononukleose (Vollblut/Serum/Plasma) kann mit heparinisiertem Vollblut (aus der Armvene oder Fingerkuppe) Serum oder Plasma durchgeführt werden.
• Gewinnung von Vollblut aus der Vene: Blutproben mit Antikoagulantien (Na- oder Li-Heparin, Na- oder K-EDTA, Na-Oxalat, Na-Citrat) nach üblichen Laborverfahren sammeln.
• Gewinnung von Vollblut aus der Fingerkuppe:
• Die Hand des Patienten mit Seife und warmem Wasser oder mit einem alkoholgetränkten Tupfer reinigen. Abtrocknen.
• Die Hand in Richtung Fingerspitze des Mittel- oder Ringfingers durch Rubbeln massieren ohne die vorgesehene Einstichstelle zu berühren.
• Die Haut mit einer sterilen Lanzette punktieren. Den ersten Bluttropfen wegwischen.
• Vorsichtig die Hand vom Handgelenk über die Handfläche bis zum Finger hin rubbeln, um die Bildung eines Bluttropfens an der Einstichstelle zu bewirken.
• Probe des Vollblutes aus der Fingerkuppe mit Hilfe eines heparinisierten Kapillarröhrchens auf die Testkassette geben:
• Mit dem Ende des heparinisierten Kapillarröhrchens das ausgetretene Blut berühren bis etwa 50 µl aufgesaugt sind. Luftblasen vermeiden.
• Auf das obere Ende des Kapillarröhrchens ein Saugbällchen aufsetzen, das durch Zusammendrücken des Saugbällchens die Blutprobe auf die Probenöffnung (S) der Testkassette geben.
• Serum oder Plasma so bald wie möglich aus dem Blut abtrennen, um Hämolyse zu vermeiden. Nur klare, nicht-hämolysierte Proben verwenden.
• Der Test sollte sofort nach Probengewinnung durchgeführt werden. Die Proben nicht längere Zeit bei Raumtemperatur aufbewahren. Serum- und Plasmaproben können bei 2-8°C bis zu 3 Tage aufbewahrt werden. Für eine längere Aufbewahrung Proben bei unter -20°C lagern. Durch Venenpunktur gesammeltes Vollblut kann bei 2-8°C bis zu 2 Tage vor der Testdurchführung aufbewahrt werden. Vollblut nicht einfrieren. Vollblut aus der Fingerkuppe sollte sofort untersucht werden.
• Proben vor der Testdurchführung Raumtemperatur erreichen lassen. Eingefrorene Proben sollten vor der Testdurchführung vollständig aufgetaut sein und gut gemischt werden. Proben sollten nicht mehrfach aufgetaut und eingefroren werden.
• Wenn die Proben verschickt werden sollen, sind diese gemäß den lokalen Vorschriften bzgl. des Transports von krankheitserregenden Agenzien zu verpacken.

MATERIALIEN

Mitgelieferte Materialien

• Testkassetten
• Puffer
• Einmal-Tropfpipetten
• Gebrauchsanweisung

Zusätzlich erforderliche Materialien

• Kurzzeitmesser
• Probensammelbehälter (für Vollblut aus der Armvene)
• Lanzetten (nur für Vollblut aus der Fingerkuppe)
• Zentrifuge (nur für Plasma)
• Heparinisierte Einmal-Kapillarröhrchen und Saugbällchen (nur für Vollblut aus der Fingerkuppe)

TESTDURCHFÜHRUNG

Vor der Austestung Testkassetten, Proben und/oder Kontrollen Raumtemperatur (15-30°C) erreichen lassen.

1. Testkassette aus dem Folienbeutel entnehmen und baldmöglichst verwenden. Die besten Ergebnisse werden erzielt wenn der Test innerhalb einer Stunde durchgeführt wird.

2. Die Testkassette auf eine saubere, ebene Unterlage legen.

Serum oder Plasma Proben:
Die Probenpipette senkrecht halten und 1 hängenden Tropfen Serum oder Plasma in die Probenvertiefung (S) der Testkassette geben dann 2 hängende Tropfen Puffer hinzugeben und den Kurzzeitmesser starten. Siehe Abbildung unten.

Vollblut (Vene) Proben:
Die Probenpipette senkrecht halten und 1 hängenden Tropfen heparinisiertes Vollblut  in die Probenvertiefung (S) der Testkassette geben, dann 2 hängende Tropfen Puffer  hinzufügen und den Kurzzeitmesser starten. Siehe Abbildung unten.

Vollblutproben (Fingerkuppe) Proben:
Die Probenpipette senkrecht halten und 1 mit einer heparinisierten Kapillare aus der Fingerkuppe gewonnenen, hängenden Tropfen Vollblut in die Probenvertiefung (S) der Testkassette geben, dann 2 hängende Tropfen Puffer hinzufügen, den Kurzzeitmesser starten. Siehe Abbildung unten.

3. Warten bis zum Erscheinen der farbigen Linie(n). Das Ergebnis sollte nach 5 Minuten abgelesen werden. Ergebnis nicht nach mehr als 10 Minuten auswerten.

INTERPRETATION DER ERGEBNISSE

(Bitte Abbildung oben beachten)

POSITIV:* Zwei deutlich rote Linien erscheinen. Eine Linie sollte sich im Kontrollbereich (C) und eine weitere Linie im Testbereich (T) befinden.

*HINWEIS: Die Intensität der roten Linie im Testlinien Bereich (T) kann, je nach der in der Probe vorliegenden Konzentration der IM heterophilen Antikörper variieren. Deshalb sollte jede schwache Rotfärbung im Testbereich (T) positiv bewertet werden.

NEGATIV: Eine farbige Linie erscheint im Kontroll-Linien Bereich (C). Im Testbereich (T) erscheint keine deutlich farbige Linie.

UNGÜLTIG: Es erscheint keine Kontroll-Linie (C). Unzureichendes Probenvolumen oder inkorrekte Verfahrenstechniken sind die wahrscheinlichsten Gründe für das Ausbleiben der Kontroll-Linie. Verfahrensablauf überprüfen und den Test mit einer neuen Testkassette durchführen. Falls das Problem weiterbesteht, die Testpackung ab sofort nicht weiterverwenden und sich mit dem örtlichen Vertriebshändler in Verbindung setzen.

QUALITÄTSKONTROLLE

Der Test beinhaltet eine Verfahrenskontrolle. Eine gefärbte Linie im Kontroll-Linien Bereich (C) wird als interne Verfahrenskontrolle betrachtet. Sie bestätigt ausreichendes Probenvolumen, entsprechende Membrandurchfeuchtung und korrekte Durchführung.

Zusätzlich zu den in ihrem Labor üblichen Qualitätskontroll-Verfahren wird empfohlen, von jeder Person, die das Testverfahren durchführt, mindestens einmal für jede Testpackung eine positive und eine negative Kontrolle durchzuführen. Dies bestätigt, dass die Reagenzien und die Testkassette ordnungsgemäß arbeiten und, dass das Testverfahren von dem  Anwender richtig durchgeführt wird. Eine positive und eine negative Kontrolle sind nicht im Lieferumfang enthalten.

Durchführung des externen Qualitätskontrolltestes

1. Das Fläschchen senkrecht halten und einen vollen, hängenden Tropfen der positiven oder negativen Kontrolllösung in die Probenvertiefung (S) der Testkassette geben und 1 hängenden Tropfen Puffer hinzufügen.
2. Bei Schritt 3 der Testdurchführung fortfahren.
3. Die Testergebnisse nicht verwenden, wenn die Kontrollen nicht die erwarteten Ergebnisse erzielen. Wiederholen Sie den Test oder kontaktieren Sie Ihren Vertriebshändler.

EINSCHRÄNKUNGEN

1. Der Keul-o-test Mononukleose (Vollblut/Serum/Plasma) ist nur für die In-vitro-Diagnostik durch Fachpersonal. Der Test dient nur zum Nachweis von IM Antikörpern in Vollblut, Serum oder Plasma proben. Es kann weder ein quantitativer Wert noch ein Anstieg der Konzentration der IM Antikörper mit diesem qualitativen Test bestimmt werden.
2. Der Keul-o-test Mononukleose (Vollblut/Serum/Plasma) zeigt nur das Vorhandensein von IM Antikörpern in der Probe an und sollte nicht das einzige Kriterium bei der Diagnose einer Mononukleose-Infektion sein.
3. Wie bei allen diagnostischen Tests müssen alle Ergebnisse, die dem Arzt zur Verfügung stehen, zusammen mit anderen klinischen Informationen ausgewertet werden.
4. Sollte das Testergebnis negativ ausfallen, klinische Symptome aber weiterhin bestehen, sind weitere Teste oder andere klinische Methoden angeraten. Ein negatives Ergebnis schließt zu keiner Zeit die Möglichkeit einer infektiösen Mononukleose Infektion aus.

ERWARTETE WERTE

In 35%-50% der berichteten Fälle verursacht das Eptein-Barr Virus (EBV) bei Jugendlichen oder jungen Erwachsenen infektiöse Mononukleose. ^1,5

Das Vorkommen von EBV assoziierter infektiöser Mononukleose in den USA wurde auf 45 pro 100.000 Fälle geschätzt und ist am höchsten bei Jugendlichen und jungen Erwachsenen - mit etwa 2 von 1.000 Fällen. Bei EBV Infektionen gibt es kein jahreszeitenabhängiges Muster. Die Inkubationszeit beträgt 10-60 Tage, obwohl bei Kindern oder Jugendlichen 7-14 Tage häufig vorkommt.

TESTEIGENSCHAFTEN

Sensitivität

Der Keul-o-test Mononukleose (Vollblut/Serum/Plasma) wurde mit Proben ausgewertet, die durch einen führenden kommerziell erhältlichen Objektträger-Agglutination als positiv oder negativ bestätigt waren. Der Objektträger-Agglutination diente als Referenzmethode für den Keul-o-test Mononukleose (Vollblut/Serum/Plasma). Das Ergebnis zeigt, dass die Sensitivität des Keul-o-test Mononukleose (Vollblut/Serum/Plasma) in Bezug auf den Objektträger-Agglutination >99,9% ist.

Spezifität

Der Keul-o-test Mononukleose (Vollblut/Serum/Plasma) verwendet ein für IM Antikörper hoch-spezifisches Antigen. Die Ergebnisse zeigen, dass die Spezifität des Keul-o-test Mononukleose (Vollblut/Serum/Plasma) bei 98,6% liegt bezogen auf den Objektträger-Agglutination.

Keul-o-test Mononukleose (Kassette) gegen Objektträger-Agglutination

Relative Sensitivität: >99,9% (93,2% - 100,0%)*                      Relative Spezifität: 98,6% (92,3%-100,0%)*
Relative Richtigkeit: 99,2% (95,5% - 100,0%)*                                                      * 95% Vertrauensintervall

Genauigkeit

Intra-Assay

Die Genauigkeit innerhalb des Testlaufs wurde mit drei Proben (negativ, schwach positiv, stark positiv) 3-fach bestimmt. Die negativen, schwach positiven und stark positiven Werte wurden immer >99% richtig erkannt.

Inter-Assay

Die Genauigkeit zwischen den verschiedenen Testläufen wurde mit denselben drei Proben (negativ, schwach positiv und stark positiv) in 10 unabhängigen Austestungen bestimmt. Drei verschiedene Chargen des Keul-o-test Mononukleose (Vollblut/Serum /Plasma) sind mit negativen, schwach positiven und stark positiven Proben untersucht worden. Die Proben wurden immer >99% richtig erkannt.

Kreuzreaktion

Positive Proen von RF, HBsAg, HBeAg, HBcAb, HBeAb, HCV, TB, HIV und Sífilis wurden mit der Keul-o-test Mononukleose (Kassette für Vollblut/Serum/Plasma) untersucht. Es wurde keine Kreuzreaktion festgestellt. Dies zeigt, dass der Keul-o-test Mononukleose (Kassette für Vollblut/Serum/Plasma) in hohem Maße spezifisch ist auf Antikörper gegen IM.

LITERATUR

1. Hickey SM, Strasburger VC. What Every Pediatrician Should Know About Infectious Mononucleosis In Adolescents. Pediatr Clin North Am. 1997; 44(6):1541-56.
2. Omori M. Mononucleosis. 2002. http://www.emedicine.com/EMERG/topic309.htm.
3. Linde A. Diagnosis of Epstein-Barr virus-related diseases. Scand J Infect Dis Suppl. 1996; 100:83-8.
4. Papesch M, Watkins R. Epstein-Barr virus infectious mononucleosis. Clin Otolaryngol. 2001; 26(1):3-8.
5. CDC National Center for Infectious Diseases. EBV & IM: http://www.cdc.gov/ncidod/diseases/ebv.htm.

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